人血小板VASP/P2Y12流式試劑盒

簡介：

血管擴(kuò)張刺激磷蛋白（VASP）是一種重要的細(xì)胞內(nèi)血小板蛋白，基礎(chǔ)狀態(tài)下處于非磷酸化狀態(tài)。其磷酸化，是受cAMP (環(huán)磷酸腺苷) 級聯(lián)調(diào)節(jié)。前列腺素E1(PGE1)會(huì)激活級聯(lián)反應(yīng)，然而這種級聯(lián)調(diào)節(jié)通過P2Y12蛋白受體被ADP抑制。

在檢測時(shí)，VASP的磷酸化與P2Y12受體抑制效應(yīng)密切相關(guān)，而VASP的非磷酸化狀態(tài)與P2Y12 受體激活相關(guān)。

噻氯匹定和氯吡格雷對血小板受體的抑制作用是不可逆的。這種效應(yīng)通過PGE1的激活，同時(shí)ADP的加入，而使VASP保持磷酸化，而被證實(shí)。

人血小板VASP/P2Y12流式試劑盒利用雙色流式細(xì)胞測定術(shù)，通過VASP的磷酸化狀態(tài)的測定，從而檢測P2Y12受體活性。

方法：

先將全血單獨(dú)與PGE1孵育或與PGE1+ADP混合孵育。細(xì)胞滲透后，處于磷酸化狀態(tài)的VASP通過間接免疫熒光反應(yīng)特異性的被單克隆抗體標(biāo)記。使用雙色流式細(xì)胞分析測定單獨(dú)PGE1激活的和PGE1聯(lián)合ADP處理管的校準(zhǔn)平均熒光強(qiáng)度（mean fluorescence intensities,MF1），經(jīng)減去空白對照得到校正后的MFIc，即減去陰性對照之后的平均熒光強(qiáng)度。再計(jì)算血小板反應(yīng)指數(shù)（Platelet reactivity index，PRI），即VASP磷酸化水平，評估標(biāo)本中ADP抑制VASP磷酸化的程度。

注意事項(xiàng)

 1）溶血樣本不適于檢測。

 2）紅細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著低于參考水平的標(biāo)本不適用。

3）有些標(biāo)本由于一些紅細(xì)胞溶解不完整而不適于加入2ml Reagent 1后立即分析，否則出現(xiàn)血小板與紅細(xì)胞群的交叉。為了保證紅細(xì)胞溶解完整，應(yīng)在混勻試管前在室溫放置5min，然后進(jìn)行流式細(xì)胞分析。

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